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產品信息：

產品簡介：

DiI即DiIC18(3)，全稱為1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate，是最常用的細胞膜熒光探針之一，呈現橙紅色熒光。DiI是一種親脂性膜染料，進入細胞膜后可以側向擴散逐漸使整個細胞的細胞膜被染色DiI在進入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光，DiI和磷酯雙層膜結合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖1。其中，最大激發(fā)波長為549nm，最大發(fā)射波長為565nm。

DiI可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現較難溶解時可以適當加熱，用超聲處理以促進溶解。 DiI被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-termracer)。DiI通常不會影響細胞的生存力(viability)。被DiI標記的神經細胞在體外培養(yǎng)的條件下可以存活長達4周，在體內可以長達一年。DiI在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day，在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為6mm/day。DiI除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。用于細胞膜熒光標記時，DiI的常用濃度為1-25μM，最常用的濃度為5-10μM。DiI可以直接染色活的細胞或組織，染色時間通常為5-20分鐘。對于固定的細胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高。

四種染料呈現不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，特別適合用于標記具本底熒光的細胞和組織。而，DiR在體內活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織，并且在紅外光范圍內，其本底熒光水平很低。

圖1：激發(fā)光譜和發(fā)射光譜

產品特性

CAS NO.：41085-99-8

化學名：1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

純度：≥98%（TLC）

Ex/Em：549/565 nm

外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存條件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

染色液制備

a.配置DMSO儲存液：儲存液用DMSO配置濃度1～5 mM。

【注】：1未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，可穩(wěn)定保存6個月。

必須保證所用溶劑新鮮無水。

工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。

b. 懸浮細胞染色

1.加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。

2.37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

3.孵育結束，按1000～1500 rpm離心5 min。

4.傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

5.重復（3），（4）步驟兩次以上。

c. 貼壁細胞的染色

1.將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2.從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

3.在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4.37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?span>20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

5.吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。

d. 顯微鏡檢測

☆DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

☆多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

注意事項

熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

DiD 染色固定的細胞或組織樣品時，樣品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高

表1細胞膜探針光譜和濾鏡編號: