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LwaCas13a (C2c2) CRISPR酶
| 貨號 | 32117-01/32117-03 | 售價（元） | 1300/5500 |
| 規(guī)格 | 100 pmoL/1000 pmoL | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
價格 |
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32117-01 |
LwaCas13a (C2c2) |
100 pmoL |
1300 |
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32117-03 |
LwaCas13a (C2c2) |
1,000 pmoL |
5500 |
產(chǎn)品簡介
LwaCas13a 核酸酶(又名 C2c2)是依賴于 crRNA 介導(dǎo)的 RNA 內(nèi)切核酸酶，來源于 Leptotrichia wadei 菌株。在靶標(biāo)單鏈 RNA 存在 PFS 序列的情況下，可特異地識別并剪切靶標(biāo) RNA。此外，Cas13a 也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當(dāng) LwaCas13a 蛋白與 crRNA、靶標(biāo) RNA 結(jié)合形成三元復(fù)合物后，便會被激活針對非特異序列單鏈 RNA 的反式剪切活性，將體系中的任意序列單鏈 RNA 切碎。該活性也被用于靶標(biāo)核酸的快速檢測試劑盒的開發(fā)。例如，Broad 研究所的張鋒團隊便利用 Cas13a 蛋白開發(fā)了名為“SHERLOCK”的下一代分子診斷系統(tǒng)(詳細(xì)信息請參考 PMID: 28408723)
產(chǎn)品組分
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組分 |
32117-01(100 pmol) |
32117-03(1000 pmol) |
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LwaCas13a Nuclease (10 μM)a |
100 pmol |
1000 pmol |
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10 × HOLMES Buffer 2 |
1 mL |
1 mL |
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Control Target RNA and crRNA (10 μM)b |
5 μL |
5 μL |
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ssRNA Reporter (FAM-BHQ1, 10 μM)c |
5 μL |
5 μL |
a. LwaCas13a Nuclease 濃度為 10 μM，即 10 pmol/μL，100 pmol 規(guī)格的總體積為 10 μL，1,000 pmol 規(guī)格的總體積為 100 μL；
b. Control Target RNAand crRNA應(yīng)保存于-80℃并避免反復(fù)凍融，必須在 6 個月內(nèi)使用，使用時建議取 0.5 μL 至每 20 μL 反應(yīng)體系；
c. ssRNAReporter(FAM-BHQ1)應(yīng)避光保存于-80℃并避免反復(fù)凍融，必須在 6 個月內(nèi)使用，使用時建議取 0.5 μL 至每 20 μL 反應(yīng)體系。
保存條件
Control Target RNA and crRNA 以及 ssRNA Reporter(FAM-BHQ1)于-80℃儲存，其余組分-20℃儲存；≤ 0℃運輸。
活性定義
在總體積為 20 μL 的 1 × HOLMES Buffer 2 [pH 7.6]反應(yīng)體系中，37℃反應(yīng)條件下，1 min 內(nèi)剪切1 pmol ssRNA 探針?biāo)璧?Cas13a 酶量定義為 1 transU。
例：若某批次 LwaCas13a 酶的反式切割活性為 9.0 transU/pmol，則表明 1 pmol 的該批次 LwaCas13a酶可在 1 min 內(nèi)，在上述指定的反應(yīng)條件下，反式切割 9 pmol ssRNA 探針。本公司提供的 Cas 酶 transU數(shù)值詳見各批號的 COA 檢測報告。
實驗流程
1. 反式剪切實驗
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer 2 |
2 μL |
1 × |
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10 μM LwaCas13a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM Target RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM ssRNA Reporter (FAM-BHQ1) |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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*反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實驗?zāi)康倪M行調(diào)整，用量較少時可先將各組分稀釋后加入體系，LwaCas13a Nuclease 可用 1×HOLMES Buf er 2 稀釋，稀釋后需立即使用（若要稀釋后的 Cas13 酶長期保存，請使用 Cas13 Dilution Buf er，#32013），crRNA、
Target RNA 及 ssRNA Reporter 可用 Nuclease-free Water 稀釋，但極低濃度的 Target RNA（例如 LOD 實驗）建議用 0.1% Tween 20 稀釋并使用低吸附的離心管、吸頭等耗材。
*反式剪切體系中探針的用量和預(yù)期反應(yīng)到達平臺期的時間可參考各批號 Cas 酶 transU 的具體數(shù)值，詳見本公司提供的 COA檢測報告。
實時熒光定量 PCR 儀檢測熒光信號，37℃反應(yīng)，每 30 sec 采集一次熒光信號。
實驗結(jié)果
注意事項
1. Cas13a 的順式剪切(cis-cleavage): Cas13a 在 crRNA 的引導(dǎo)下，特異性地剪切 target RNA，且對 target RNA的 PFS 序列要求并不嚴(yán)格。
2. Cas13a 的反式剪切(trans-cleavage): 當(dāng) target RNA 存在時，Cas13a/crRNA 與 target RNA 形成三元復(fù)合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同時，Cas13a 被激發(fā)反式剪切活性，將反應(yīng)體系中任意序列的單鏈 RNA切碎。
3. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。
4. Cas13a 蛋白對熱敏感，容易失活，應(yīng)全程冰上配置反應(yīng)體系，并在使用后立即將酶置于-20℃保存。
5. 本公司提供的 Cas13a 蛋白及反應(yīng)緩沖液不含任何除 Cas13a 外的任何其它核酸酶活性。
6. 本產(chǎn)品僅供科研使用。