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還原型谷胱甘肽檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號(hào) | SH0538 | 售價(jià)（元） | 360 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0538 |
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此，測定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。
測定原理：
DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0538-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑二：液體 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
1瓶 |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
GSH測定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中保溫30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μl蒸餾水，140μl試劑二，40μl試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μl上清液，140μl試劑二，40μl試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意：空白管只需要測定一次。
GSH含量計(jì)算公式：
GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度，μ mol /ml；y為吸光值）
a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr） =0.667×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=0.667×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
GSH（μ mol/ ml）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣總：上清液總體積，1 ml；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量
b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下
GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=0.75x（x為GSH濃度，μ mol /ml；y為吸光值）
（1）按蛋白濃度計(jì)算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2－A1) ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=1.334×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
GSH（μ mol/ ml）=(A2－A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2－A1)
V樣總：上清液總體積，1ml；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μl=0.02 ml；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
1. 試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
2. 最低檢出限為0.011mmol/L。