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RPA（重組酶聚合酶擴增）技術原理

英國TwistDx公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英國劍橋Babraham研究院建立的生物技術公司。該公司通過突破等溫DNA擴增，開發(fā)的重組酶聚合酶擴增專利技術(RPA),被譽為DNA診斷領域的革命性創(chuàng)新。(http://www.twistdx.co.uk) 

What is RPA?

概念：重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術。RPA技術主要依賴于三種酶：能結合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應溫度在37°C左右。

RPA技術原理：

重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應形成并啟動DNA合成，對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？欤话憧稍谑昼娭畠?nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

Who uses RPA?

以此為基礎的TwistAmp? 核酸擴增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進行常溫下的單分子核酸檢測該技術對硬件設備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領域。

TwistAmp? Basic 試劑盒可實現(xiàn) DNA 擴增。包含 DNA 擴增所需的所有酶和試劑，用戶只需提供引物和模板。使用 TwistAmp? Basic 時，即使 PCR 引物也有效。TwistAmp? Basic 已被用于固相、加尾引物、配基、電化學和微陣列等應用。

非常適用于：終點凝膠電泳 DNA 檢測、下游應用（例如亞克隆）

TwistAmp? exo 試劑盒可實現(xiàn)實時熒光 DNA 擴增。若想要以均相形式將 TwistDx RPA 擴增技術與 TwistDx 專利熒光 TwistAmp? exo 探針結合使用，則推薦使用本產(chǎn)品。用戶只需提供引物、探針和模板。更多信息請參閱手冊。

非常適用于：實時熒光 DNA 檢測

TwistAmp? nfo 試劑盒可實現(xiàn)橫向流動檢測用 DNA 擴增。若想要通過終點夾心法（例如橫向流動 [LF] 試紙條）檢測有效 DNA 擴增反應的產(chǎn)物，則適合使用本產(chǎn)品。用戶只需提供引物、探針和模板。

非常適用于：開發(fā)低成本的現(xiàn)場側向層析檢測方法。

包含凍干試劑的 TwistAmp? 試劑盒具有以下優(yōu)勢：

RPA 擴增溫度要求低，允許使用低成本、便于攜帶的檢驗設備。

干 RPA 試劑足夠穩(wěn)定，可以在室溫下運輸。

允許多種「適宜現(xiàn)場的」檢測輸出技術，例如側向層析技術和熒光技術。

RPA 對一些復雜樣本類型表現(xiàn)出高度穩(wěn)健性（即樣本耐受性），更適合于許多不同的現(xiàn)場實地應用。

除了在現(xiàn)場實地使用中的優(yōu)勢，通過 TwistAmp? 試劑盒還便于為許多應用和用途開發(fā)出快速、特異且靈敏的 DNA 和 RNA 檢測方法。

TwistAmp? Liquid 是為了提供散裝液體形態(tài)的核心 RPA 組分，最終用戶能夠以不同的比例混合這些組分，以便用戶為各自的應用配制預混液*。

TwistAmp? Liquid 具有以下優(yōu)勢：

最終用戶可自由調整預混液制備量，而不再被局限于凍干試劑的固定體積

最終用戶可自由調整反應體系中的組分比例，這使 RPA 試驗開發(fā)工作具有更大的靈活性

TwistAmp? Liquid Basic 是一款最適合用于凝膠分析或者作固相、加尾引物、適配體、電化學和微陣列應用的 DNA 擴增試劑盒。TwistAmp? Liquid exo 是一款用于以實時熒光檢測擴增反應的 DNA 擴增試劑盒。